對于HPLC來說,該如何計算死體積呢。
死體積(dead volume,V0)——由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分:進樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程,其它3部分只起峰擴展作用。為防止峰擴展,這3部分體積應(yīng)盡量減小。
死時間(dead time,t0)——不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑)通過色譜柱的時間。
測量系統(tǒng)死體積通常需要通過實驗進行測量,常用方法是通過進一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液(方法中會有規(guī)定,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流動相得到的溶液,也有直接用100%色譜純甲醇進樣的情形)時,就會得到一個色譜峰,由此峰可以測得死時間(t0),這就是t0的實測結(jié)果。
然后通過計算得到系統(tǒng)死體積:死體積(V0) = 死時間t0×流動相的流速F。
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